1.設計原則與方案本法系將一定量 hUCMSC注射液與2%的家兔紅細胞混懸液混合，溫育一定時間后，觀察其對紅細胞狀態是否產生影響的一種方法。

2.操作方法

(1)2%紅細胞混懸液的制備：取健康家兔血液，造血干細胞存儲置于含玻璃珠的錐形瓶中振搖10分鐘，或用玻璃棒攪動血液，以除去纖維蛋白原，使成脫纖血液。加入約10倍體積0.9%氯化鈉溶液混勻,1000-1500rmin，離心15分鐘，除去上清液，沉淀的紅細胞再用0.9%氯化鈉溶液按上述方法洗滌2~3次，至上清液清亮無色為止。將所得紅細胞用0.9%氯化鈉溶液制成2%的混懸液備用。

(2)細胞溶液的準備：充分混勻干細胞混懸液，取一定體積混懸液備用。

(3)檢査方法：取潔凈5只玻璃試管編號,1、2號管為干細胞供試品管,3號管為陰性對照管,4號管為陽性對照管,5號管為供試品對照管。按下表所示依次加人2%紅細胞懸液、0.9%氯化鈉溶液、純化水，混勻后立即置于(37±0.5)℃的恒溫箱中進行溫育3小時后觀察溶血和凝聚反應，加入順序和量如表7-2所示。

表7-2溶血反應

3.判斷標準

(1)如試管中的溶液呈澄明紅色，管底無細胞殘留或有少量紅細胞殘留，造血干細胞存儲表明有溶血發生；如紅細胞全部下沉，上清液無色澄明，或上清液雖有色澄明，但1、2號管和5號管肉眼觀察無明顯差異，則表明無溶血發生。

(2)若溶液中有棕紅色或紅棕色絮狀沉淀，輕輕倒轉3次仍不分散，表明可能有紅細胞凝聚發生，應置顯微鏡下觀察如可見紅細胞聚集為凝聚。

(3)當陰性對照管無溶血和凝聚發生，陽性對照管有溶血發生，若2支干細胞注射劑管中的溶液在3小時內均不發生溶血和凝聚，判定 hUCMSC注射液符合規定；若有1支干細胞注射劑管的溶液在3小時內發生溶血和(或)凝聚，應設4支干細胞注射劑管進行復試，其 hUCMSC注射液管的溶液在3小時內均不得發生溶血和(或)凝聚，否則判定 hUCMSC注射液不符合規定。

組織器官結構變化

Wang等在對間充質干細胞的安全性進行評價時，造血干細胞存儲通過給食蟹猴反復輸注間充質干細胞的給藥方式和長期毒性進行了評價，食蟹猴接受4次間充質干細胞注射后對其病理組織切片等進行檢測，均未發現注射了間充質干細胞對食蟹猴的各項生理指標產生不良影響。利用本實驗室創制的" hUCMSC注射液”，分別以1×10細胞/kg、5×10細胞/kg和1×107細胞/kg的劑量通過靜脈輸入健康食蟹猴體內，結果對心、肝、肺、腎、腦等重要器官的結構無影響。