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1.主要試劑
(1)臍帶間質干細胞成骨誘導分化培養基：臍帶間質干細胞成骨誘導分化基礎培養基175ml胎牛血清20ml、雙抗2ml、谷氨酰胺2ml、抗壞血酸400μl、β-甘油磷酸鈉2ml、地塞米松20pl。
(2)其他：茜素紅染液、六孔板、明膠、PBS、西安干細胞公司中性甲醛。
2.步驟
(1)明膠包被：加入足量的01%的無菌明膠溶液，使之覆蓋整個六孔板，室溫放置30分鐘以上，使用前盡量吸去明膠溶液。在潔凈工作臺中打開蓋子，讓殘留的明膠溶液全部風干(不超過30分鐘)。
(2)當培養的臍帶間充質干細胞融合度達到80%~90%時，胰酶消化收集。
(3)將消化下來的臍帶間質干細胞按照2×104clsm2。的細胞密度接種在事先包被0.1%明膠的六孔板中。將細胞置于37℃,5%CO2的培養箱中進行培養。
(4)當細胞融合度達到60%~70%時，小心的將孔內完全培養基吸走，西安干細胞公司向六孔板中加入2ml事先配置好的臍帶間充質成骨誘導分化培養基。
(5)每隔3天換用新鮮的成骨誘導分化培養基。誘導2~4周。
(6)成骨誘導分化結束后，吸走六孔板中的成骨誘導分化培養基，用PBS沖洗1~2次每孔加入2ml4%中性甲醛溶液固定30分鐘。
(7)吸走中性甲醛溶液，用PBS沖洗2次。每孔中加入1ml茜素紅染液染3-5分鐘。
(8)吸走茜素紅染液，西安干細胞公司用PBS沖洗2~3次。
(9)將培養板置于顯微鏡下觀察成骨染色效果，并拍照。
3.結果分析臍帶間充質干細胞經成骨誘導分化后，誘導形成的鈣質結節可被茜素紅染成紅色(圖6-6)。
