除了上述體外跨胚層多向分化潛能鑒定之外， UCMSC還具有十分突出的免疫調(diào)節(jié)和自分泌功能，這在更多時(shí)候其實(shí)才是 UCMSC最主要的生物學(xué)功能及臨床應(yīng)用價(jià)值所在，因此，這些內(nèi)容也應(yīng)該成為 UCMSC質(zhì)量鑒定的重要指標(biāo)，而不是之一。

(一)免疫調(diào)節(jié)功能分析

通常將 UCMSC與外周血淋巴細(xì)胞按一定比例(1:5、1:10、1:20、1:40)進(jìn)行體外共培養(yǎng)3天后，干細(xì)胞存儲(chǔ)檢測(cè)淋巴細(xì)胞亞群比例的變化，結(jié)果T細(xì)胞的增殖率下降50%以上，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例增加20%以上，CD8細(xì)胞比例降低，培養(yǎng)上清中的干擾素(IFN-y)含量下降。

1.原理異體來源的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞通過分泌可溶性的細(xì)胞因子，對(duì)人T淋巴細(xì)胞具有抑制作用。抑制作用與臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的數(shù)量呈正比。

2.試劑外周淋巴細(xì)胞分離液、六孔板、 Transwell離培養(yǎng)板、PHA、MI檢測(cè)試劑盒。

3.步驟

(1)選擇生長良好，干細(xì)胞存儲(chǔ)細(xì)胞融合度達(dá)80%~90%的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，胰酶消化后離心計(jì)數(shù)。

(2)按照2×10 cells/ml的細(xì)胞密度接種在六孔板中，并置于37℃,5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

(3)用外周血淋巴細(xì)胞分離液通過密度梯度離心法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞，用貼壁法分離得出T淋巴細(xì)胞，并計(jì)數(shù)。

(4)待臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞貼壁后，按照 UCMSC：外周血T淋巴細(xì)胞為1:1、1:5、1:10、1:20的比例在 Transwell隔離的上層加入T細(xì)胞。每孔加入200μPHA刺激。置于37℃，5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

(5)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和外周血T淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)72小時(shí)后，把T淋巴細(xì)胞移入96孔板中，每孔加入20μMTS孵育2小時(shí)后，用酶標(biāo)儀(490nm)測(cè)定各孔吸光度值。

(6)根據(jù)吸光度值來判斷T淋巴細(xì)胞的活性。

4.結(jié)果分析在PHA的刺激下，T淋巴細(xì)胞的活性隨著臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的數(shù)量增加而逐漸減弱。

(二)抗炎效應(yīng)檢測(cè)分析

釆用兔或靈長類急性關(guān)節(jié)炎模型進(jìn)行評(píng)價(jià)，給動(dòng)物模型通過靜脈輸入1×10°細(xì)胞/kg，隔日1次，連續(xù)3次，結(jié)果顯示關(guān)節(jié)紅腫消失，病理組織觀察可見關(guān)節(jié)組織中浸潤炎性細(xì)胞減少，關(guān)節(jié)液內(nèi)的Ⅱ-1、TNF-a等炎性細(xì)胞因子含量降低。

(三)自分泌功能檢測(cè)分析

UCMSC分泌數(shù)量眾多的可溶性生物活性因子和外分泌體，干細(xì)胞存儲(chǔ)通過檢測(cè)培養(yǎng)上清中的這些活性因子和外泌體含量可初步判定 UCMSC的自分泌功能。外泌體的組成成分相對(duì)復(fù)雜，關(guān)于不同細(xì)胞產(chǎn)生的外泌在組成結(jié)構(gòu)與功能方面的差異尚為完全闡明，一般檢測(cè) UCMSC的分泌功能分析以檢測(cè)可溶性生物活性因子為主，重點(diǎn)是有選擇性地檢測(cè)促細(xì)胞生長類因子的含量。 UCMSC在體外無血清培養(yǎng)體系中或生理鹽水培養(yǎng)24小時(shí)后，培養(yǎng)上清中新出現(xiàn)有多種涉及細(xì)胞生長、分化及免疫調(diào)節(jié)相關(guān)的可溶性生物活性因子，其中涉及促進(jìn)細(xì)胞生長的因子有干細(xì)胞生長因子(SCF)、神經(jīng)生長因子(NGF)、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VECF)堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)肝細(xì)胞生長因子(HGF)骨形成蛋白(BMP)白介素類(L)、轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)等，可選擇性地檢測(cè)培養(yǎng)上清中的3~5種有代表性的生長因子的含量，作為判定 UCMSC自分泌功能的指標(biāo)，也可根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析，全面評(píng)估 UCMSC的自分泌功能。