(三)細胞保護劑

1.滲透性細胞內冷凍保護劑，可以滲透到細胞內，一般是一些小分子物質，主要包括甘油、DMSO、乙二醇、丙二醇、乙酰胺、甲醇等，經常使用的是甘油、DMSO。

2.非滲透性細胞外冷凍保護劑不能滲透到細胞內，臍帶干細胞存儲一般是些大分子物質，主要包括聚乙烯吡咯烷酮(PV)蔗糖、聚♂二醇、葡聚糖、白蛋白以及羥乙基淀粉(HES)等。

白蛋白不僅具有維持血漿膠體滲透壓和結合離子的能力，起到維持細胞外液的滲透壓平衡的作用；而且人血白蛋白本身所帶靜電荷為負電荷，能夠起到防止細胞集聚而處于分散狀態的功能，另外，人血白蛋白是臨床常用藥物，容易獲取且質量可以得到保障，加入到干細胞制劑中使用相對安全。

(四)細胞凍存方案的選擇

1.傳統的細胞凍存方法選取鑒定合格的 hUCMSO，臍帶干細胞存儲用0.25% trypsin-EDTA消化，完全培養基終止，離心去除上清，加入細胞凍存液(10%DMS0、5%甘油、85%的含20%FBS的完全培養基)并懸浮混勻細胞調整細胞濃度為5×10°個/ml，分裝入無菌凍存管中，凍存管上清楚標注細胞名稱、產婦名字、批號和凍存時間并詳細記錄存檔；將凍存管放入程序降溫盒中置于-70℃冰箱4小時后轉入-1%6℃液氮罐中保存備用。使用時復蘇細胞，離心漂洗后再使用。

2. hUCMSC注射液細胞凍存方法在經檢驗合格符合GMP生產條件且具備完整的干細胞制劑制備質量管理體系的細胞工程實驗室無菌條件下選取鑒定和檢驗合格的hUCMSC，使用臨床應用的0.25% trypsin-EDTA消化收集細胞生理鹽水洗滌3遍后，加入臨床注射用的細胞凍存液(10%臨床級DMSO、5%人血白蛋白、低分子肝素鈣10501U/4×10個細胞、85%復方電解質注射液)并懸浮混勻細胞，調整細胞濃度為2×10個m，分裝入臨床用無菌凍存袋中，每個凍存袋裝入20ml，凍存袋上清楚標注細胞名稱、產婦名字、批號、臍帶干細胞存儲凍存時間和凍存數量并詳細記錄存檔；把凍存袋放入程序降溫儀中完成程序降溫后轉入-196℃度液氮罐中保存備用，臨床上使用前直接從液氮中取出放入37℃專用孵育箱中復蘇，然后用生理鹽水5倍稀釋后使用。該方法本實驗室也只在獼猴身上實驗，未發現明顯不良反應，但要在臨床上推廣使用還需進行大量研究。